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Hamilton阴离子交换柱操作方法
发布时间:2018-05-02   点击次数:538次

1.简介

  柱填充硅胶基质的强阴离子交换材料,含有季胺功能团。特别设计用于使用常规HPLC分析有机和无机阴离子。

  2.洗脱液

  推荐在这类柱上使用的洗脱液要求低电导,或者UV吸收的缓冲液,例如磷酸缓冲液,pH范围从2.5到6.5。

  绝对不能使用水杨酸缓冲液,因为水杨酸分解产物会改变固定相的性质。另外,硝酸铵(1mM)可以改善峰型,而且不会明显影响保留时间,检测或定量结果。

  洗脱液在使用以前要脱气,并用0.45微米滤膜过滤,防止发生检测和泵送问题。

  一定要在开始使用系统以前检查有否微生物生长,否则你的柱子会堵塞,柱压会升高到无法接受的水平。

  3.色谱柱老化

  在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。

  要老化这类柱子,首先要使用甲醇淋洗,然后使用去离子水。再用你选用的洗脱液进行平衡。

  在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。因此没有必要在*次使用时用水冲洗)。

  4.样品准备

  保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱,不管是来自流动相还是样品。特别地,要禁止导入颗粒杂质。这些zui终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能去除。

  5.流量和压力

  注意:zui高压力:不锈钢柱:4500psi;玻璃柱:3000psi

  增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。

  如果你想更换柱子,,要降低流量至0,等待洗脱液完全流出柱子为止(2分钟)。

  拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。

  高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。

  使用保护柱(见第6节)会防止污染物沉积在分析柱上。

  6.保护柱

  一定要使用保护柱,因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选择性。对于ChromSep柱我们建议使用ChromSepAnion交换保护柱。当柱压增高的或者观察到柱效降低的时候就需要更换保护柱了。

  7.进样量和浓度

  当样品的洗提强度比洗脱液低(在柱样品预浓缩)的时候,更高的样品量也可以注射。

  8.温度

  色谱柱可以在室温环境使用。为了提高柱子的稳定性,建议不要在40°C以上使用。

  9.Hamilton 阴离子交换柱贮存

  在贮存柱子以前,建议先用去离子水,然后用甲醇冲洗。一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱。

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